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样品制备技术不过硬 电镜仪器再好也没用

2015-6-4 12:03:11点击:

2015年5月29日-6月2日,“2015全国生物医学农林电镜技术研讨会暨生物电镜前沿技术培训班”在浙江大学举行。本次会议特别邀请了国内外知名专家教授和电镜工作者讲授生物电子显微镜技术的最新发展,交流生物样品制备和应用方面的技术经验,并安排部分学员参加实验操作及演示。

第二军医大学杨勇骥教授在研讨会上做了题为“常规生物电镜样品制备”的报告,介绍了自己对于常规电镜制样技术的理解及应用心得。

杨勇骥表示:“电镜技术是目前形态学分析的最高层次,电镜的最终目标就是获得完美的照片。现今社会科研竞争十分激烈,生物电镜技术是理工医综合性最强、精细程度最高的应用技术之一,是能够真正体验到‘细节’决定成败的一种特殊的技术方法。而生物电镜又是一个不出活的技术,因此必须要在电镜工作中刻苦钻研,才能有所成就。”

杨勇骥强调说,要想得到完美的电镜照片,必须要有过硬的生物电镜样品制备技术,否则哪怕是采用最高精尖的电镜也得不到理想的结果。报告中杨勇骥比较了自己实验室里一台使用了30年的电镜和2009年采购的新型电镜对同样的样品的观察结果,结果发现使用了30年的电镜由于制样好,观察结果反而更好。

生物样品常规电镜制样包括:样品取材、固定、脱水、浸透、包埋、修快、定位、超薄切片、电子染色等步骤。杨勇骥指出这么多环节,任何一个环节出现一点问题,整个制样就失败了。报告中他详细的介绍了各个环节应该注意的要点,以及易犯的错误。

从杨勇骥的介绍中,我们体会到了生物电镜制样的要求是多么精细。就单拿超薄切片这一个步骤来说,要想获得理想的切片效果,首先在切片时一定要有良好的心境,甚至要在自己心情比较好的时候才能来做这项工作。另外切片时要确保没有人打扰,还要避免对切片机大声咳嗽、打喷嚏等。切片的环境不能过于潮湿,否则会引起震颤。要选择合适的切片速度。捞片时要选择洁净的、未氧化的、亲水性良好的载网才能捞起完整的切片,所用载网如果放了几天,已经被氧化,就不要用来捞片了,同时注意用载网的正面捞片。另外,还有确保玻璃刀或钻石刀的刀口平整。

最终理想的超薄切片应该是厚薄均一、无空洞、无震颤、无皱褶、无杂质污染的连续切片,而且除了切片这个环节,前期的取材、脱水、浸透、包埋、修快、定位与后期的染色等对切片效果的影响是环环相扣。

最后,杨勇骥说道:“生物电镜制样技术是生物医学技术中最精细、最繁复的技术之一。生物电镜工作者没有教授与技术员之分,只有不断实践摸索技术,精心总结经验,才能掌握这门技术的精髓,才能配合使用电镜获得理想精美的超微结构图像。”